HPLC法测定石杉碱甲含量

2014-09-09 13:02:27来源: testrust

  昆明石杉,系石杉科石杉属植物,为我国特有种,主要分布于云南、贵州等地,生于灌木下、苔藓丛中。20世纪80年代,我国科学工作者从同属植物蛇足石杉中分离到石杉碱甲(Hup-A),并阐明它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂,对治疗重症肌无力、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的效果,现已被广泛应用于临床。为了科学、合理地利用石杉属植物资源,本实验首次采用HPLC法对昆明石杉中石杉碱甲的含量进行测定,为寻找和筛选石杉碱甲新的植物资源提供科学依据。

  1、仪器与试药

  Aigent1100型HPLC色谱仪(带四元泵,自动进样器,紫外检测器等);电子分析天平(日本岛津);KQ50B超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电热恒温水浴锅(上海医疗器械厂);石杉碱甲对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100243-200401);乙腈(色谱纯);二次重蒸水;其他试剂均为分析纯。

  实验药材采至贵州黔东南,由贵州科学院生物研究所王培善教授鉴定为昆明石杉H.kunmingensisChing.,标本存放于贵阳中医学院民族医药研究所,标本凭证(20056)。

  2、方法与结果

  2.1色谱条件

  ZORBAXSB-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92∶8),检测波长为310nm,流速1ml·min-1,柱温25℃,进样量为5μl。在此色谱条件下,样品中的石杉碱甲与其他峰能达到基线分离,其理论塔板数为4656,对称因子为0.92。石杉碱甲的保留时间为11.15min,对照品与样品的色谱图见图1。

  2.2样品的制备

  精密称取实验药材细粉2g于500ml的圆底烧瓶中,每次加入200ml石油醚提取3次,弃去滤液。滤渣再用95%的甲醇提取3次,合并滤液并回收溶剂,加入2%的酒石酸溶解,用氨水调节pH值至8.0,再用氯仿萃取至Dragendorffors反应呈阴性,挥干有机溶剂,用无水乙醇溶解并定容至25ml即得。

  2.3线性关系的考察

  精密称取石杉碱甲对照品2.40mg于25ml容量瓶中以无水乙醇溶解并定容,得浓度为0.096mg·ml-1对照品溶液,再分别稀释成0.096,0.048,0.024,0.012,0.006,0.003mg·ml-1的对照品供试液,在色谱条件下测定。以进样浓度对峰面积进行回归,得方程:Y=6776.0151X1.0305,r=0.99995。可知石杉碱甲在0.015~0.48μg之间与峰面积呈良好线性关系。

  2.4精密度实验

  取石杉碱甲对照溶液,在色谱条件下重复进样6次,结果石杉碱甲峰面积的RSD为0.36%(n=6)。

  2.5稳定性实验

  取供试品溶液,每隔2h测定1次,考察石杉碱甲的含量变化,结果含量的RSD为0.85%(n=6),表明供试品在10h内稳定。

  2.6重复性实验

  称样品6份,按“2.2”项的要求制备6份供试液,在色谱条件下分别进行测定,结果Hup-A含量的RSD为0.60%(n=6)。

  2.7回收率

  实验精密称取昆明石杉药材细粉6份,每份1g,分别加入对照品供试液(0.003mg·ml-1)100ml,按样品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试液进行测定,计算回收率(见表1)。结果石杉碱甲的平均回收率为99.63%,RSD=0.56%(n=6)。表1石杉碱甲加样回收率实验结果(略)

  2.8样品的测定

  按“2.2”项的要求精密称取样品3份,制备供试液,按色谱条件进行测定,重复3次,取平均值,石杉碱甲在原植物中的平均含量为0.03%。

  3、讨论

  首次采用HPLC法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量。

  测定方法是在其它石杉中石杉碱甲含量测定方法的基础上,改用ZORBAXSB-C18色谱柱及以0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92∶8)为流动相。实验证明该方法易行、灵敏、准确、可靠。在同科属植物中,昆明石杉是石杉碱甲含量相对较高的一个植物品种,达到0.03%。

关键字:HPLC法  石杉  碱甲含量

编辑:什么鱼 引用地址:http://www.eeworld.com.cn/Test_and_measurement/2014/0909/article_9474.html
本网站转载的所有的文章、图片、音频视频文件等资料的版权归版权所有人所有,本站采用的非本站原创文章及图片等内容无法一一联系确认版权者。如果本网所选内容的文章作者及编辑认为其作品不宜公开自由传播,或不应无偿使用,请及时通过电子邮件或电话通知我们,以迅速采取适当措施,避免给双方造成不必要的经济损失。
论坛活动 E手掌握
微信扫一扫加关注
论坛活动 E手掌握
芯片资讯 锐利解读
微信扫一扫加关注
芯片资讯 锐利解读
推荐阅读
全部
HPLC法
石杉
碱甲含量

小广播

独家专题更多

富士通铁电随机存储器FRAM主题展馆
富士通铁电随机存储器FRAM主题展馆
馆内包含了 纵览FRAM、独立FRAM存储器专区、FRAM内置LSI专区三大部分内容。 
走,跟Molex一起去看《中国电子消费品趋势》!
走,跟Molex一起去看《中国电子消费品趋势》!
 
带你走进LED王国——Microchip LED应用专题
带你走进LED王国——Microchip LED应用专题
 
电子工程世界版权所有 京ICP证060456号 京ICP备10001474号 电信业务审批[2006]字第258号函 京公海网安备110108001534 Copyright © 2005-2016 EEWORLD.com.cn, Inc. All rights reserved