HPLC法测定石杉碱甲含量

2014-09-09 13:02:27来源: testrust 关键字:HPLC法  石杉  碱甲含量

  昆明石杉,系石杉科石杉属植物,为我国特有种,主要分布于云南、贵州等地,生于灌木下、苔藓丛中。20世纪80年代,我国科学工作者从同属植物蛇足石杉中分离到石杉碱甲(Hup-A),并阐明它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂,对治疗重症肌无力、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的效果,现已被广泛应用于临床。为了科学、合理地利用石杉属植物资源,本实验首次采用HPLC法对昆明石杉中石杉碱甲的含量进行测定,为寻找和筛选石杉碱甲新的植物资源提供科学依据。

  1、仪器与试药

  Aigent1100型HPLC色谱仪(带四元泵,自动进样器,紫外检测器等);电子分析天平(日本岛津);KQ50B超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电热恒温水浴锅(上海医疗器械厂);石杉碱甲对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100243-200401);乙腈(色谱纯);二次重蒸水;其他试剂均为分析纯。

  实验药材采至贵州黔东南,由贵州科学院生物研究所王培善教授鉴定为昆明石杉H.kunmingensisChing.,标本存放于贵阳中医学院民族医药研究所,标本凭证(20056)。

  2、方法与结果

  2.1色谱条件

  ZORBAXSB-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92∶8),检测波长为310nm,流速1ml·min-1,柱温25℃,进样量为5μl。在此色谱条件下,样品中的石杉碱甲与其他峰能达到基线分离,其理论塔板数为4656,对称因子为0.92。石杉碱甲的保留时间为11.15min,对照品与样品的色谱图见图1。

  2.2样品的制备

  精密称取实验药材细粉2g于500ml的圆底烧瓶中,每次加入200ml石油醚提取3次,弃去滤液。滤渣再用95%的甲醇提取3次,合并滤液并回收溶剂,加入2%的酒石酸溶解,用氨水调节pH值至8.0,再用氯仿萃取至Dragendorffors反应呈阴性,挥干有机溶剂,用无水乙醇溶解并定容至25ml即得。

  2.3线性关系的考察

  精密称取石杉碱甲对照品2.40mg于25ml容量瓶中以无水乙醇溶解并定容,得浓度为0.096mg·ml-1对照品溶液,再分别稀释成0.096,0.048,0.024,0.012,0.006,0.003mg·ml-1的对照品供试液,在色谱条件下测定。以进样浓度对峰面积进行回归,得方程:Y=6776.0151X1.0305,r=0.99995。可知石杉碱甲在0.015~0.48μg之间与峰面积呈良好线性关系。

  2.4精密度实验

  取石杉碱甲对照溶液,在色谱条件下重复进样6次,结果石杉碱甲峰面积的RSD为0.36%(n=6)。

  2.5稳定性实验

  取供试品溶液,每隔2h测定1次,考察石杉碱甲的含量变化,结果含量的RSD为0.85%(n=6),表明供试品在10h内稳定。

  2.6重复性实验

  称样品6份,按“2.2”项的要求制备6份供试液,在色谱条件下分别进行测定,结果Hup-A含量的RSD为0.60%(n=6)。

  2.7回收率

  实验精密称取昆明石杉药材细粉6份,每份1g,分别加入对照品供试液(0.003mg·ml-1)100ml,按样品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试液进行测定,计算回收率(见表1)。结果石杉碱甲的平均回收率为99.63%,RSD=0.56%(n=6)。表1石杉碱甲加样回收率实验结果(略)

  2.8样品的测定

  按“2.2”项的要求精密称取样品3份,制备供试液,按色谱条件进行测定,重复3次,取平均值,石杉碱甲在原植物中的平均含量为0.03%。

  3、讨论

  首次采用HPLC法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量。

  测定方法是在其它石杉中石杉碱甲含量测定方法的基础上,改用ZORBAXSB-C18色谱柱及以0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92∶8)为流动相。实验证明该方法易行、灵敏、准确、可靠。在同科属植物中,昆明石杉是石杉碱甲含量相对较高的一个植物品种,达到0.03%。

关键字:HPLC法  石杉  碱甲含量

编辑:什么鱼 引用地址:http://www.eeworld.com.cn/Test_and_measurement/2014/0909/article_9474.html
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